Alteraciones de la transcripción y splicing de los genes BRCA1 y BRCA2 y susceptibilidad genética a cáncer de mama y ovario.

Tanto la transcripción como el procesamiento del pre-ARNm (splicing) están sometidos a un control estricto por proteínas reguladoras y secuencias nucleotídicas específicas localizadas tanto en el promotor (unión de factores de transcripción) como en el pre-ARNm (enhancers/silenciadores). Cualquier mutación en estos elementos puede afectar la expresión y estar correlacionada con la susceptibilidad a una enfermedad. De hecho, estudios previos de nuestro grupo mostraron que un tercio de las mutaciones deletéreas de BRCA1/BRCA2 inducían un splicing aberrante en cáncer de mama y ovario hereditario (CMOH). Nuestro objetivo central es determinar la asociación entre alteraciones de la expresión de ambos genes causadas por mutaciones germinales y la susceptibilidad a cáncer de mama. Objetivos específicos: 1) Análisis funcional de las regiones promotoras y alteraciones transcripcionales de BRCA1/BRCA2 en CMOH; 2) Asociación entre splicing aberrante de BRCA1 y BRCA2 y CMOH; 3) Regulación del procesamiento de los exones de gran tamaño de BRCA1 (exón 11) y BRCA2 (exones 10 y 11) e implicaciones en CMOH.
Metodología: Las pacientes CMOH procederán de las Unidades de Consejo Genético de Castilla y León, y se utilizarán datos de las mutaciones registradas en las bases de datos internacionales. Las secuencias y mutaciones se analizarán con los programas TRANSFAC, TFSearch y Jaspar (promotores) y NNSPLICE y HSF (splicing). Los ensayos funcionales de transcripción y splicing se realizarán mediante constructos de ambos promotores con un gen reportero de luciferasa y minigenes híbridos en el vector de splicing pSAD, respectivamente. Se secuenciarán las regiones promotoras de ambos genes en 200 pacientes.